虫媒传染病是由嗜血节肢动物通过吸血传播的一类传染病,造成千万人死亡的黑死病以及目前流行的黄热病、寨卡都是由媒介传播的。主要媒介包括蚊、蜱、螨、蟑螂、虱等。我国虫媒生物种类繁多,分布情况复杂,对虫媒传染病的快速诊断能有效控制其流行并为患者的有效治疗提供依据。下面我们就来聊一聊虫媒传染病诊断流程及诊断过程中需要的仪器试剂。
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常见虫媒传染病及主要传播媒介
常见的虫媒病毒传染病有:登革热(伊蚊)、乙脑(三带喙库蚊)、森林脑炎(蜱)、黄热病(蚊虫)、西尼罗河热(蚊)、发热伴血小板减少综合征(蜱)、肾综合出血热(鼠)、基孔肯雅热(伊蚊)、寨卡(蚊虫)
常见的虫媒细菌传染病有:鼠疫(鼠蚤)
常见的虫媒寄生虫传染病有:疟疾(按蚊)、黑热病(白蛉)
常见的虫媒立克次体传染病有:人粒细胞无形体病(蜱)、查菲埃立克体病(蜱)、恙虫病(恙螨幼虫)、斑疹伤寒(虱、鼠蚤)
常见的虫媒螺旋体传染病有:钩端螺旋体病(鼠、猪等)、回归热(虱、蜱)、莱姆病(硬蜱)
检测流程
虫媒病毒病:病毒分离培养较困难,诊断有赖于血清学检测结果。但可通过接种动物或敏感细胞分离病毒,分离出病毒后进行理化和生物学特性试验鉴定。
虫媒细菌病:如鼠疫菌可以直接分离病原体鉴定,也可进行噬菌体裂解试验,血清凝集试验,特异荧光抗体染色鉴定。
虫媒寄生虫病:怀疑疟疾感染时可通过显微镜或疟疾快速诊断检测法诊断。怀疑黑热病时穿刺染色镜检或培养后观察。同时可进行抗原及核酸检测。
虫媒立克次体病:该菌难以培养,对营养要求苛刻,且血中立克次体少,分离培养鉴定不宜推广。目前采用血清学检验和PCR方法进行检测。
虫媒螺旋体病:回归热螺旋体培养较困难。钩端螺旋体病和莱姆病可以通过分离培养鉴定。同时可以进行血清学和分子生物学检测。
标本采集
时间:怀疑细菌感染时应在急性发病期和抗生素使用前采集标本;病毒分离和病毒抗原检测的标本,应在发病初期和急性期采样。对媒介昆虫进行采集。
部位:根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位,采集不同的标本。
容器:无菌容器、拭子、采血管、螺口塑料试管
分离培养鉴定
分离培养是最可靠直接的判定方法,但需要时间长,对人员技术要求高。
血清学鉴定
具有高度特异性、敏感性,可定性或定量,但会出现交叉反应。常用血清学反应来鉴定分离到的病原菌,以最终确诊检测结果。
ELISA
酶联免疫吸附试验,是当前应用最广泛的血清学测定方法,它将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用结合,敏感性高,不需特殊设备,观察结果方便。市场可用来检测虫媒传染病的ELISA试剂盒很多,需根据需求认真挑选购买。
胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标记物的新型免疫标记技术,成本低,不需特殊设备,标记物稳定,使用方便快速,不需培训,便于基层和现场使用,所有反应可在15分钟内完成。
目前采用胶体金免疫原理的快速检测试剂条,使用十分方便。在疟疾治疗前,WHO建议对所有疑似疟疾病例进行寄生虫学诊断检测,胶体金快速检测试条即可在很短时间内获得寄生虫学确诊结果,指导用药。
分子生物学诊断
诊断流程
核酸提取
可参照相关标准人工配置试剂,也可使用核酸提取试剂盒手工提取,但通量较高时需要很长时间,核酸质量存在差异。核酸提取自动化系统应运而生,德国QIAGEN公司推出的QIAcube HT提供中到高通量的解决方案,专用试剂适用于如血清、血浆、尿液、粪便、痰液,细胞悬液,组织、食品等核酸的提取。
QIAcube HT
普通PCR
普通梯度PCR扩增仪是分子生物学实验室必配的设备,Life Technologies公司的ProFlex PCR仪可配备四种加热模块,其中3 x32孔模块可同时运行三个独立模块,允许多用户同时使用,该仪器控温精确,均一性好,重现性好,升降温速度快,且仪器内置大屏触摸屏,方便编程和检查运行状态。
ProFlex PCR仪
荧光定量PCR
实时荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,多重荧光定量PCR技术可同时对多个样本进行分析,已广泛应用于病原菌检测、病毒检测、基因检测、基因突变分析等各种基因分析。
Life Technologies公司推出的ViiA 7实时荧光定量PCR仪,有6个非耦合激发滤光片和发射滤光片,可实现最多的染料组合和最大的多重分析能力,孔间、批间、不同仪器间差异低,且单重反应中可检测低至1.5倍的目标数量差异。具有速度快、通量高、操作简便、结果可靠、模块灵活等优点。
ViiA 7实时荧光定量PCR仪
目前市场上已有多种检测虫媒传染病的荧光PCR检测试剂盒。达安基因推出的荧光探针法可检测的虫媒传染病病原体就有登革热病毒、基孔肯雅病毒、黄热病病毒、西尼罗病毒、寨卡病毒、乙型脑炎、森林脑炎、无形体属、发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒、肾综合征汉城(滩)病毒、疟原虫、钩端螺旋体、鼠疫耶尔森菌等。
卡尤迪现场快检方案
卡尤迪生物科技(北京)有限公司推出的现场核酸快速检测平台,是基于“一键式免核酸提取 Mini8实时荧光定量PCR检测技术”和“一滴血快速核酸现场检测技术”搭建,体积小、可移动、无需校准、操作简单、结果易判读,可在1.5h内得到结果。
该平台的使用可使出入境检验检疫局,疾病预防控制中心等相关机构在应对卫生领域突发事件的快速反应和处理能力得到质的飞跃。
该快速检测平台包由核酸检测箱和免核酸提取检测试剂盒两部分组成。其中Mini8便携检测系统已被WHO纳入官方推荐产品目录。
便携式核酸检测箱 MD-B 免核酸提取检测试剂盒
2015年至今,该平台在应对布尼亚病毒、寨卡等虫媒传染病方面都取得了突出的成绩。